Субпопуляции В-лимфоцитов у больных ревматоидным артритом и влияние на них ингибитора рецепторов интерлейкина 6

При хорошо изученной клинической эффективности и безопасности данные о влиянии терапевтического ингибирования интерлейкина 6 (ИЛ6) на В-клетки малочисленны и противоречивы. Предварительные сообщения показали, что функция В-клеток и гуморальный иммунный ответ могут быть модулированы под влиянием ингибитора рецепторов ИЛ6.
Цель исследования – оценить влияние 12-месячной терапии тоцилизумабом (TЦЗ) на фенотип B-клеток и экспрессию генов при РА и проанализировать связь между субпопуляциями B-клеток и активностью РA.
Материал и методы. Обследовано 24 пациента с РА (20 женщин и 4 мужчины); медиана возраста составила 55 [49; 64] лет; продолжительности болезни – 72 [24; 108] мес; DAS28 – 5,8 [5,3; 6,3]; все больные были серопозитивны по ревматоидному фактору (РФ), 87% – по антителам к циклическому цитруллинированному пептиду (АЦЦП). Пациенты получали ТЦЗ из расчета 8 мг/кг каждые 4 нед. После 12 мес лечения согласно критериям эффективности EULAR (DAS28) хороший эффект был достигнут у 54%, удовлетворительный – у 46% больных РА. Контрольная группа состояла из 29 добровольцев (21 женщина и 8 мужчин; медиана возраста – 58,5 [53,0; 62,0] года). Иммунофенотипирование лимфоцитов периферической крови проводили при включении в исследование и через 12 мес. Абсолютное и относительное количество CD19+B-лимфоцитов, B- клеток памяти (CD19+CD27+), непереключенных (CD19+IgD+CD27+) и переключенных (CD19+IgD-CD27+) В-клеток памяти, наивных (CD19+IgD+CD27-), двойных негативных (CD19+IgD-CD27-), транзиторных (CD19+IgD+CD10+CD38++CD27) B-клеток, плазмоцитов (CD19+СD38+) и плазмобластов (CD19+СD38+++IgD-CD27+CD20-) определялось методом многоцветной проточной цитофлуорометрии.
Результаты и обсуждение. У больных РА относительное и абсолютное количество B-клеток памяти (CD19+CD27+) (1,3 [0,9; 1,7]%, 0015 [0,001; 0,003]•109/л), переключенных В-клеток памяти (CD19+IgDCD27+) (6,8 [3,6; 11,6]%, 0,01 [0,005; 0,02]•109/л) и абсолютное число транзиторных В-клеток (CD19+CD38++CD10+IgD+CD27-) (0,00009 [0; 0,00028]•109/л) оказалось ниже, чем у доноров: 2,2 [1,1; 3,0]%, 0,003 [0,001; 0,007]•109/л; 12,8 [9,3; 17,0]%, 0,02 [0,01; 0,04]•109/л; 0,0001 [0; 0,0003]•109/л соответственно (p<0,05 для всех случаев). Через 12 мес после начала терапии ТЦЗ определялось снижение относительного и абсолютного количества плазмобластов (CD19+СD38+++CD27+IgD-CD20-) с 0,15 [0,1; 0,3] до 0,1 [0,01; 0,1]% и с 0,0003 [0,00007; 0,004]•109/л до 0,0001 [0; 0,0003]•109/л соответственно (p<0,05). При этом относительное и абсолютное количество B-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) у пациентов с РА оставалось ниже, чем у доноров: 1,0 [0,7; 1,2] и 2,2 [1,1; 3,0]%; 0,001 [0,006; 0,003]•109/л и 0,003 [0,001; 0,007]•109/л; 3,1 [1,1; 4,2] и 12,8 [9,3; 17,0]%; 0,003 [0,002; 0,006]•109/л и 0,02 [0,01; 0,04]•109/л соответственно (p<0,05 для всех случаев). Численность других субпопуляций В-лимфоцитов через 12 мес существенно не изменилась. У больных РА при включении в исследование были выявлены корреляции между абсолютным количеством B-клеток памяти (CD19+CD27+) и уровнем С-реактивного белка (r=0,50; p<0,05); абсолютным количеством плазмобластов (CD19+СD38+++CD27+IgD-CD20-) и содержанием РФ (r=0,41 и r=0,52; p<0,05). Корреляций субтипов В-клеток с клинико-лабораторными показателями через 12 мес после назначения ТЦЗ не отмечалось.
Заключение. Иммунофенотипирование субтипов В-лимфоцитов периферической крови показало уменьшение относительного и абсолютного количества B-клеток памяти (CD19+CD27+) и переключенных B-клеток памяти (CD19+CD27+IgD-) у больных РА по сравнению со здоровыми донорами. Выявленные корреляции между числом В-клеток памяти, плазмобластов и значениями лабораторных показателей у больных с высокой активностью РА могут свидетельствовать об участии В-лимфоцитов в патогенезе РА. Наблюдалось снижение уровня плазмобластов после 12 мес терапии ТЦЗ.

1. Насонов ЕЛ. Проблемы иммунопатологии ревматоидного артрита: эволюция болезни. Научно-практическая ревматология. 2017;55(3):277-94 [Nasonov EL. Рroblems of rheumatoid arthritis immunopathology: evolution of the disease. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2017;55(3):277-94 (In Russ.)]. doi: 10.14412/1995-4484-2017-277-294

2. Leslie D, Lipsky P, Notkins AL. Autoantibodies as predictors of disease. J Clin Invest. 2001;108:1417-22. doi: 10.1172/JCI14452

3. Leandro M. B cells and rheumatoid factors in autoimmunity. Int J Rheum Dis. 2015;18:379-81. doi: 10.1111/1756-185X.12690

4. Lino AC, Dorner T, Bar-Or A, Fillatreau S. Cytokine-producing B cells: a translational view on their roles in human and mouse autoimmune diseases. Immunol Rev. 2016;269:130-44. doi: 10.1111/imr.12374

5. Насонов ЕЛ, Лила АМ. Ингибиция интерлейкина 6 при иммуновоспалительных ревматических заболеваниях: достижения, перспективы и надежды. Научно-практическая ревматология. 2017;55(6):590-9 [Nasonov EL, Lila AM. Inhibition of interleukin 6 in immune inflammatory rheumatic diseases: achievements, prospects, and hopes. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2017;55(6):590-9 (In Russ.)]. doi: 10.14412/1995-4484-2017-590-599

6. Scott LJ. Tocilizumab: A Review in Rheumatoid Arthritis. Drugs. 2017 Nov;77(17):1865-79. doi: 10.1007/s40265-017-0829-7

7. Yeo L, Toellner KM, Salmon M, et al. Cytokine mRNA profiling identifies B cells as a major source of RANKL in rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis. 2011 Nov;70(11):2022-8. doi: 10.1136/ard.2011.153312

8. Mihara M, Hashizume M, Yoshida H, et al. IL-6/IL-6 receptor system and its role in physiological and pathological conditions. Clin Sci (Lond). 2012 Feb;122(4):143-59. doi: 10.1042/CS20110340

9. Burmester GR, Feist E, Dö rner T. Emerging cell and cytokine targets in rheumatoid arthritis. Nat Rev Rheumatol. 2014 Feb;10(2):77-88. doi: 10.1038/nrrheum.2013.168

10. Roll P, Muhammad K, Schumann M, et al. In vivo effects of the anti-interleukin-6 receptor inhibitor tocilizumab on the B cell compartment. Arthritis Rheum. 2011 May;63(5):1255-64. doi: 10.1002/art.30242

11. Moura RA, Quaresma C, Vieira AR, et al. B-cell phenotype and IgD-CD27- memory B cells are affected by TNF-inhibitors and tocilizumab treatment in rheumatoid arthritis. PLoS One. 2017 Sep 8;12(9):e0182927. doi: 10.1371/journal.pone.0182927

12. Lubbers J, Vosslamber S, van de Stadt LA, et al. B cell signature contributes to the prediction of RA development in patients with arthralgia. Ann Rheum Dis. 2015;74:1786-8. doi: 10.1136/annrheumdis-2015-207324

13. Van Baarsen LGM, de Hair MJH, Ramwadhdoebe TH, et al. The cellular composition of lymph nodes in the earliest phase of inflammatory arthritis. Ann Rheum Dis. 2013;72:1420-4. doi: 10.1136/annrheumdis-2012-202990

14. Amara K, Steen J, Murray F, et al. Monoclonal IgG antibodies generated from joint-derived B cells of RA patients have a strong bias toward citrullinated autoantigen recognition. J Exp Med. 2013;210:445-55. doi: 10.1084/jem.20121486

15. Li S, Yu Y, Yue Y, et al. Autoantibodies from single circulating plasmablasts react with citrullinated antigens and Porphyromonas gingivalis in rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum. 2016;68:614-26. doi: 10.1002/art.39455

16. Muhammad K, Roll P, Einsele H, et al. Delayed acquisition of somatic hypermutations in repopulated IGD+CD27+ memory B cell receptors after rituximab treatment. Arthritis Rheum. 2009;60:2284-93. doi: 10.1002/art.24722

17. Adlowitz DG, Barnard J, Biear J, et al. Expansion of Activated Peripheral Blood Memory B Cells in Rheumatoid Arthritis, Impact of B Cell Depletion Therapy, and Biomarkers of Response. PLoS One. 2015 Jun 5;10(6):e0128269. doi: 10.1371/journal.pone.0128269

18. Fekete A, Soos L, Szekanecz Z, et al. Disturbances in B- and T-cell homeostasis in rheumatoid arthritis: suggested relationships with antigen-driven immune responses. J Autoimmun. 2007;29:154-63. doi: 10.1016/j.jaut.2007.07.002

19. Moura RA, Graca L, Fonseca JE. To B or not to B the conductor of rheumatoid arthritis orchestra. Clin Rev Allergy Immunol. 2012 Dec;43(3):281-91. doi: 10.1007/s12016-012-8318-y

20. Супоницкая ЕВ, Алексанкин АП, Александрова ЕН и др. Определение субпопуляций В-лимфоцитов периферической крови методом проточной цитофлуорометрии у здоровых лиц и больных ревматическими заболеваниями. Клиническая лабораторная диагностика. 2015;60(6):30-33 [Suponitskaya EV, Aleksankin AP, Alexandrova EN, et al. Characterization of peripheral blood b-cell subset in patients with systemic lupus erythematosus. Klinicheskaya Laboratornaya Diagnostika. 2015;60(6):30-3 (In Russ.)].

21. Nakayamada S, Kubo S, Yoshikawa M, et al. Differential effects of biological DMARDs on peripheral immune cell phenotypes in patients with rheumatoid arthritis. Rheumatology (Oxford). 2018 Jan 1;57(1):164-74. doi: 10.1093/rheumatology/kex012

22. Lü bbers J, van Beers-Tas MH, Vosslamber S, et al. Changes in peripheral blood lymphocyte subsets during arthritis development in arthralgia patients. Arthritis Res Ther. 2016;18(1):205. doi: 10.1186/s13075-016-1102-2

23. Moura RA, Weinmann P, Pereira PA, et al. Alterations on peripheral blood B-cell subpopulations in very early arthritis patients. Rheumatology (Oxford). 2010;49:1082-92. doi: 10.1093/rheumatology/keq029

24. Mahmood Z, Muhammad K, Schmalzing M, et al. CD27-IgDmemory B cells are modulated by in vivo interleukin-6 receptor (IL-6R) blockade in rheumatoid arthritis. Arthritis Res Ther. 2015 Mar 14;17:61. doi: 10.1186/s13075-015-0580-y

25. Illei GG, Shirota Y, Yarboro CH, et al. Tocilizumab in systemic lupus erythematosus: data on safety, preliminary efficacy, and impact on circulating plasma cells from an open-label phase I dosage-escalation study. Arthritis Rheum. 2010;62:542-52. doi: 10.1002/art.27221

26. Меснянкина АА, Соловьев СК, Александрова ЕН и др. Динамика субпопуляции В-лимфоцитов у больных системной красной волчанкой на фоне терапии генно-инженерными биологическими препаратами. Научно-практическая ревматология. 2017;55(3):252-60 [Mesnyankina AA, Solovyev SK, Aleksandrova EN, et al. The time course of changes in B lymphocyte subpopulations in patients with systemic lupus erythematosus during therapy with biological agents. Nauchno-Prakticheskaya Revmatologiya = Rheumatology Science and Practice. 2017;55(3):252-60 (In Russ.)]. doi: 10.14412/1995-4484-2017-252-260

27. Marie-Cardine A, Divay F, Dutot I, et al. Transitional B cells in humans: characterization and insight from B lymphocyte reconstitution after hematopoietic stem cell transplantation. Clin Immunol. 2008;127:14-25. doi: 10.1016/j.clim.2007.11.013

28. Fonseca JE, Santos MJ, Canhao H, Choy E. Interleukin-6 as a key player in systemic inflammation and joint destruction. Autoimmun Rev. 2009;8:538-42. doi: 10.1016/j.autrev.2009.01.012

29. Jourdan M, Cren M, Robert N, et al. IL-6 supports the generation of human long-lived plasma cells in combination with either APRIL or stromal cell-soluble factors. Leukemia. 2014 Aug;28(8):1647-56. doi: 10.1038/leu.2014.61

30. Muhammad K, Roll P, Seibold T, et al. Impact of IL-6 receptor inhibition on human memory B cells in vivo: impaired somatic hypermutation in preswitch memory B cells and modulation of mutational targeting in memory B cells. Ann Rheum Dis. 2011;70:1507-10. doi: 10.1136/ard.2010.141325

31. Kikuchi J, Hashizume M, Kaneko Y, et al. Peripheral blood CD4(+)CD25(+)CD127(low) regulatory T cells are significantly increased by tocilizumab treatment in patients with rheumatoid arthritis: increase in regulatory T cells correlates with clinical response. Arthritis Res Ther. 2015 Jan 21;17:10. doi: 10.1186/s13075-015-0526-4

32. Fleischer S, Ries S, Shen P, et al. Anti-interleukin-6 signalling therapy rebalances the disrupted cytokine production of B cells from patients with active rheumatoid arthritis. Eur J Immunol. 2018 Jan;48(1):194-203. doi: 10.1002/eji.201747191

33. Alivernini S, Kurowska-Stolarska M, Tolusso B, et al. MicroRNA-155 influences B-cell function through PU.1 in rheumatoid arthritis. Nat Commun. 2016 Sep 27;7:12970. doi: 10.1038/ncomms12970

34. Wu Y, El Shikh ME, El Sayed RM, et al. IL-6 produced by immune complex-activated follicular dendritic cells promotes germinal center reactions, IgG responses and somatic hypermutation. Int Immunol. 2009;21:745-56. doi: 10.1093/intimm/dxp041